遗传转化（遗传转化体系）

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植物遗传转化系统是指利用生物的、物理的或化学的途径将外源基因导入植物细胞，而建立转基因植株的技术体系。迄今已经开发了多种遗传转化系统，包括载体型遗传转化系统、DNA直接转化系统、种质转化系统等。

植物的遗传转化 20世纪70年代末80年代初，人们用野生型Ri和Ti质粒转化烟草和马铃薯细胞获得再生植株后，以Ti质粒为载体的植物遗传转化技术随之被建立。近年来植物的遗传转化技术得到了迅速发展，建立了多种转化系统。

就是你从质粒选取构建到转化等利用各种分子或基因工程手段构建目标转化子，然后让转化子表现出相应性状或表达目标产物的整个过程中所运用的方法，技术，以及构建的材料和产物统称为遗传转化体系。我的理解是这样的。

除了转入新的外源基因外，还可以通过转基因技术对生物体基因的加工、敲除、屏蔽等方法改变生物体的遗传特性，获得人们希望得到的性状。

第三类：种质转化系统法；包括植物原位真空渗入法和花粉管通道法。（一）基因枪法；（1）原理：基因枪法把遗传物质或其他物质附着于高速微弹直接射入细胞、组织和细胞器。

根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。

是需要隔离的，一般试验阶段是需要在实验室进行，不能进大田。即使需要在大田中进行，也要与其他作物进行隔离。在花粉传播的有效范围内保证没有其他作物。

遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养再生植株可分成两大类，第一类据要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类不需要通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管通道法。

．将重组DNA分子导入农杆菌：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌，此农杆菌和提供Ti质粒的农杆菌应该不同。4．植株转化实验：农杆菌与植物细胞的共培养，在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率。

该系统是将目的基因连接于载体DNA上，通过载体将外源基因转入植物细胞。载体型植物遗传转化系统主要有致瘤土壤杆菌Ti质粒介导法和发根致瘤土壤杆菌Ri质粒介导法。

作为载体的DNA分子，必须能够在寄主细胞中独立复制和表达，载体上具有两个以上易于检测的遗传标记，具有多个限制性内切酶的单一切点。载体分子不宜过大，以便于DNA体外操作。

植物遗传转化是应用重组DNA技术、细胞组织培养技术或种质系统转化技术，有目的地将外源基因或DNA片段插入到受体植物基因组中并通过减数分裂获得新植株的技术。

第二类：载体介导的转化方法；通过将目的基因连接在植物表达载体上，随着载体DNA的转移而将外源目的基因整合到植物基因组中。农杆菌介导转化法，病毒介导的转化法第三类：种质转化系统法；包括植物原位真空渗入法和花粉管通道法。

因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。

1、遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养再生植株可分成两大类，第一类据要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介导转化法、基因枪法；另一类不需要通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管通道法。

2、农杆菌介导的甘蓝遗传转化实验需要注意以下几点：操作环境：实验操作环境应该洁净严谨，避免污染。农杆菌菌株和基因转移载体的选择：根据实验需求选择适当的农杆菌菌株和基因转移载体，并进行预实验确定最佳转化条件。

3、已有研究表明，根癌农杆菌介导木霉等丝状真菌的遗传转化同样需要vir基因的表达。目前，对根癌农杆菌介导转化中参与外源基因转移的相关基因的转录和调控机理已研究得相当深入。其中，农杆菌Ti质粒上毒性基因vir的表达是完成遗传转化所必需的。

4、每2周继代一次，一般继代2-4次即可获得适合转基因的嫩黄色、颗粒状的胚性愈伤组织。在继代培养2周后，挑选胚性颗粒用于遗传转化。3．农杆菌的培养在转化平板上挑取单菌落在1ml农杆菌培养基中培养。

5、农杆菌能在自然条件下感染大多数双子叶植物的受伤部位，植物细胞被侵染后形成肿瘤。农杆菌的质粒上有一段转移DNA（T-DNA），具有向植物细胞传递外源基因的能力，而细菌本身并不进入受体细胞。

叶盘法由于不需进行原生质体操作等，方法简单，获得转化植株也更快，是用植物外植体为材料进行转基因的一个良好途径。

农杆菌介导的石刁柏转基因植株的获得，特别是农杆菌介导的转基因水稻和转基因玉米的获得，不仅改变了单子叶植物不是农杆菌的天然寄主的看法，而且证明农杆菌介导法完全可以用于禾谷类作物的遗传转化。

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